石蠟切片
我們先來說說石蠟切片怎么做。組織包埋進石蠟以后,，做好的組織蠟塊常溫保存即可,。但是如果你們實驗室冰箱很空，放冰箱也可以,。不過呢,，蠟塊如果放冰箱倒真是有個很實用的功能，就是切出來的切片不容易裂（等下我們來討論原因）,，所以如果蠟塊事先一直是常溫保存的,，在切片之前，最好也提前1-2h放入4℃預冷,。預冷的這段時間,，可以先做好準備工作：
1、打開漂片機，溫度調(diào)至40℃,。做石蠟切片除了切片機以外還需要另一種儀器,，那就是漂片機了。漂片機主要有兩個功能,，一個是用溫水把切片鋪展,、鋪平，便于貼到載玻片上,，另一個就是把剛貼好切片的載玻片晾干,。所以漂片機實際上就是個功能略復雜一些的水浴鍋，除了可以把水加熱,，還可以盛放貼了切片的載玻片順便烘干切片,；
2、由于切下來的薄層石蠟就像狗皮膏藥,，非常容易黏在物體表面（你能想象的所有物體），并且黏上了就很難摳下來,，所以事先要在切片機下面的臺面上鋪一層保鮮膜,，這樣掉下來的石蠟都落在保鮮膜上，便于清理,；
3,、漂片的時候由于各種原因，會在水面上留下不少石蠟,，這些石蠟也需要用保鮮膜黏走,，所以在漂片機的水浴邊上也得搭上一片保鮮膜用于清理；
4,、準備好切片需要的工具,，包括刀片（刀片是消耗品且比較貴）、眼科鑷（彎頭,、直頭皆可）,、毛筆（清掃用）、卷紙,、防脫玻片,、鉛筆。
漂片機
好了,，等漂片機熱乎乎的,，可以開始切了。先把蠟塊從冰箱里拿出來,，夾到切片機上,。夾蠟塊的時候蠟塊擺放的方向可以有兩種選擇，或橫夾或豎夾，
1,、刀片的長度約10cm,，切片過程中可能會卷刃（刀片卷刃會刮破標本），但是卷也只是某一個點會卷,，別的地方都是好的,，這時候選擇豎夾有可能避開卷刃處；
2,、有的標本比較狹長,，如果豎夾會導致標本通過刀片的時間比較長（時間越長，標本被破壞的可能性越大）,，這時如果選擇橫夾可以較快地切出切片,，盡可能保證標本完好。
夾好蠟塊以后,，挑一個用過很多次的,、不是很新的、就算不那么鋒利也可以的刀片,，先夾到刀片夾上,，用來“修片”。這里給大家解釋一下為什么要“修片”,。做好的石蠟塊表面不是光滑的,，并且組織外表面是有相當一部分石蠟遮擋的，所以一刀下去肯定是不能立刻切到組織的,，就算一刀下去能切到組織,，也不一定能切到你想要的部位或大小或形狀或……，總之,，第一刀或前幾刀都不會讓你滿意,，所以需要“預先”切幾刀，把表面那些不是你想要的東西切走,，這就叫“修片”,。那么有小伙伴要問了，是不是以前切過的蠟塊再拿過來切就不需要修了呢,？答案是：同樣需要,。原因是以前切過的切面，放到現(xiàn)在你使用的這個切片機上,，很可能不平行于刀片（肉眼很難看出來,，一切就知道），也就導致蠟塊夾好以后,，開始切的前幾張切片不會是完整的,，所以也要“修片”,。修完片子，換上嶄新的刀片（就算不嶄新,，用過一次兩次的也行,，夠鋒利就可以），把切片厚度調(diào)到3μm）,，注意下一個動作,，用嘴對著石蠟塊哈一口氣，不哈一口氣的切片是沒有靈魂的,。下面就搖動手柄,，讓切片飛起來。切的過程只有一個注意點,，那就是“快”,，切慢了就等著裂吧。切的過程中如果裂了,，就哈氣,，如果有劃痕就換個方向夾蠟塊或換刀片，請記得不管換什么,，都要從修片開始,。
切片
切到不少滿意的片子就可以進行“漂片”了。用眼科鑷挑選合適的切片鋪到水上,，這時要耐心等待一個節(jié)點，就是組織周圍包裹的石蠟將化沒化之時（說白了就是原本規(guī)則的正方形石蠟片變得有點不規(guī)則時）,，用載玻片從水下把切片撈上來,，撈的時候切片也就貼在載玻片上了），載玻片記得提前用鉛筆在磨毛的部位標記切片分組,。貼好的載玻片放在晾干架上烘干,，石蠟切片就完成啦，切下來的片子可以放在染色架上（就是個小吊籃）,，方便存取,。
染色架
石蠟切片的做法講完了，下一講咱們繼續(xù)說說冰凍切片的做法,。
做冰凍切片的組織,，固定后需要脫水（啊奧）。一般采用的方法是蔗糖梯度脫水,，從低濃度到高濃度依次脫水,，做法也很簡單，就是用蔗糖配成相應濃度（一般是10%,，20%,，30%三個濃度）的溶液放到密封的容器里，然后把組織丟進去泡著。泡完一個濃度的蔗糖泡下一個濃度,，濃度遞增,。詳細做法童鞋們百度看看。脫完水以后可以放-80℃保存很久很久很久,。
1,、關于卷刃，有些聰明的小伙伴可能要說了,，刀片有10cm,，把卷刃的地方挪開不就行了嗎？然而事實上是最好不要,，不然很可能有血光之災,。因為有些刀片夾與刀片等長，如果挪刀片,，那就意味著有一節(jié)刀片是凸在外面的,，刀片十分鋒利，很有可能切到人肉,。事實證明,，就算規(guī)規(guī)矩矩把刀片安裝在刀片夾上，也是有可能切到手的,，因為刀片是赤裸裸地暴露的,。不過現(xiàn)在的切片機有些已經(jīng)注意到這個問題，把刀片夾做的比刀片長很多,，不過大家還是小心為上,，總不能為了切個片把命都搭上吧。
2,、石蠟切片一般切3μm厚,，如果有特殊要求，可以自行調(diào)整,。正是因為切片只有3μm厚,，所以如果童鞋們想要觀察多個不同部位的情況，請避免選擇連續(xù)的切片,，因為連續(xù)的切片上你觀察到的結果沒有太大差別,。當然有些情況恰恰是需要觀察連續(xù)切片的，那就另當別論了?，F(xiàn)在就帶來了一個問題,，如果不連續(xù)選片，那應該間隔幾張切片選擇呢,？這個問題的答案需要具體情況具體分析,。舉個例子,，如果你想觀察的是組織里某種細胞內(nèi)的情況，那么兩張切片之間的距離至少相差一個細胞的直徑,，這樣你才能看到下一個細胞的情況,。順便說一下修片的厚度，由于修片目的只是獲得一個理想的平面,，所以可以大刀闊斧,，七八九十微米都沒什么問題。
3,、其實哈氣是避免組織裂開,，這跟前面提到的把組織放冰箱是一個目的。石蠟塊在處理的過程中經(jīng)固定,、脫水,，組織變得比較干脆（本俠想說的是既干又脆），導致切片的時候很容易裂開,。如果這時候在上面蒙上一層水汽,，情況會好很多。所以常溫保存的蠟塊要提前放冰箱預冷,，切之前也要哈一口氣,。
4、漂片的這個時間節(jié)點為什么要這么選呢,？我們切下來的片子,，中間是組織，周圍是石蠟,，能牢牢黏在載玻片上的是石蠟而不是組織,，即使是防脫玻片，對組織的吸附力也并不是很強,，所以石蠟不僅僅能方便切片，同樣也有助于貼片,。但是常溫的石蠟片作為固體,，貼在載玻片上并不服帖,，所以通過加熱的方法，讓石蠟稍稍融化,，這樣就能讓切片緊緊地貼在載玻片上了,。但是如果加熱時間太長,，石蠟融化過度,，石蠟就散了，組織會與石蠟脫離,，那石蠟也就失去存在的意義了,。所以時間節(jié)點的把握很重要。