作者：CACLP
50年代,，美國W.H.Coulter在世界上研發(fā)了第一臺血液分析儀Automated hematology analyzer(AHA)?，F(xiàn)代血液分析儀按功能可分為：全血細胞計數(shù)、白細胞分類,、血細胞計數(shù)和分類功能的擴展,。
一、檢測原理及技術(shù)
①電阻抗法原理
②儀器的組成和功能
信號發(fā)生器
放大器
閾值調(diào)節(jié)器
甄別器
整形器
計數(shù)器
放大→閾值調(diào)節(jié)→甄別→整形→計數(shù)
③電阻抗原理進行血細胞計數(shù)和分類原理圖（見下）
特點：是最早的血細胞計數(shù)理論
缺點：不能對單個細胞進行系統(tǒng)分析,，得出的參數(shù)為群體平均值,。
射頻指射頻電流,，是每秒變化大于10000次的高頻交流電磁波。電導(dǎo)性即電的傳送性能,。高頻電流能通過細胞壁,滲入細胞膜脂質(zhì)層可測定細胞的導(dǎo)電性,，提供細胞內(nèi)部化學(xué)成分、細胞核和細胞質(zhì),、顆粒成分等特征性信息,。
用途：特別有助于鑒別體積雖相同、但內(nèi)部結(jié)構(gòu)性質(zhì)不同的細胞（或相似體積的顆粒）,。
激光散射法
①原理：處理細胞（稀釋,、染色,、球形化）→ 通過石英毛細管（激光束照射）→ 細胞產(chǎn)生與其特征相應(yīng)的各種角度的散射光 → 周圍有不同角度的信號檢測器
不同結(jié)果角度代表的意義如下：
前向散射光（FSC）:數(shù)量和表面體積大小
側(cè)向散射光（SSC）:顆粒,、細胞核等復(fù)雜性
散射熒光（FL）:FL1綠色，F(xiàn)L2橘紅色,，F(xiàn)L3紅色
激光散射法是現(xiàn)代五分類血液分析儀的主要檢測原理之一,。
②基本組成
光源：氣體激光（氦-氖、氬氣等）,、固體激光（半導(dǎo)體）,、鎢光源（多色光）
鞘流：維持顆粒于液流中央，順序,、單個,、恒速向前流動，即流體動力學(xué)聚焦
細胞懸液：被檢測細胞（顆粒）的懸液,，由氣壓導(dǎo)入流動池
光檢測器：接受來自各種角度的散射光或吸收光信號,，并轉(zhuǎn)換成相應(yīng)特征的電信號
功能水平上對單個細胞進行定量分析，可高速分析上萬個細胞,，并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù),，是最先進的細胞定量分析技術(shù)。
③網(wǎng)織紅細胞檢測原理
利用流式細胞儀（flow cytometer,FCM）的方法進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù),。因網(wǎng)織紅細胞的胞質(zhì)中尚殘留RNA,可與丫啶橙,、哌若寧-Y、噻唑橙等染料結(jié)合,，應(yīng)用FCM測量發(fā)出的特定顏色熒光,，進行RNA定量。
分光光度法
①原理：遵循Lambert-Beer比色定律,，即吸光度A與液體物質(zhì)濃度C成正比,。
②組成：單色光源、檢測池和比色容器,、光檢測器,。
③血紅蛋白測定：溶血劑→ 紅細胞溶解 → Hb → 與溶血劑中某些成分結(jié)合 → 穩(wěn)定的血紅蛋白衍生物 → 530～550nm → 比色,。
血液分析儀常用檢驗參數(shù)的原理和技術(shù)
白細胞五分類計數(shù)及相關(guān)參數(shù)檢測
①過氧化物酶（peroxidase）染色通道檢測原理
②體積、電導(dǎo)和光散射（VCS）法
VCS：Volume,，Conductivity,，lightScatter
電阻抗技術(shù) →細胞體積、數(shù)量
電導(dǎo)技術(shù)→ 內(nèi)部結(jié)構(gòu)性質(zhì)不同的細胞
光散射技術(shù) →細胞內(nèi)的顆粒性,、核分葉性,、核表面結(jié)構(gòu)
VCS技術(shù)下各種白細胞群的特征
③多角度偏振光散射法（MAPSS）
血標本經(jīng)鞘液稀釋后→WBC近似自然狀態(tài)→Hb溢出，鞘流水分子則進入RBC →不干擾白細胞檢測→多角度偏振光散射法分4個角度檢測
0°：反映細胞大小,，同時檢測細胞數(shù)量
7°：反映細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及核染色質(zhì)的復(fù)雜性,。
90°：反映細胞內(nèi)部顆粒及分葉狀況。
90°D：在光散射過程中,，嗜酸性粒細胞顆粒豐富,，可去偏振光，與中性粒細胞鑒別,。
優(yōu)點：可鑒別白細胞亞群,、異常細胞類型；白細胞分類不受有核紅細胞,、血小板凝聚,、不溶解紅細胞和細胞碎片等干擾物質(zhì)影響。
成熟紅細胞系列參數(shù)檢測原理
電阻抗法
流式細胞術(shù),、鞘流電阻抗法
流式細胞術(shù)激光散射法
電阻抗法和光散射法
血小板系列參數(shù)檢測原理
電阻抗法
流式細胞激光核酸熒光染色和電阻抗法
激光散射法
固體激光散射法,、電阻抗法和單克隆抗體熒光染色散射法
網(wǎng)織紅細胞系列參數(shù)檢測原理
非熒光染料染色法：新亞甲藍
熒光染料染色法：噁嗪、堿性槐黃O,、聚次甲基,、噻唑橙、氧氮雜芑750等,。
有核紅細胞系列參數(shù)檢測原理
VCS法
流式激光/熒光染色法
白細胞計數(shù)和分類通道衍生法
阻抗法和噻唑橙熒光染色流式細胞術(shù)
二,、結(jié)果顯示
血細胞直方圖:
即細胞體積分布圖形，橫坐標為細胞體積大小,，縱坐標為一定體積的細胞數(shù)目,。
①白細胞直方圖
②紅細胞直方圖
③血小板直方圖
散點圖：
平面散點圖只顯示2維（X、Y軸）圖像,，在坐標系,，X軸和Y軸分別表示一種檢測原理或檢測角度的細胞信息，在坐標象限中的任何一個散點反映的就是X軸和Y軸的綜合信息,。
在不同的檢測原理下,，坐標上散點的位置如：上下（高低）、左右,、前后（可重疊）或散點群的疏密,，均與相應(yīng)類別的細胞外形,、體積大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu),、胞核胞質(zhì),、顆粒數(shù)量等理化特性密切相關(guān)。
異常散點圖包括病理性和非病理性干擾物質(zhì)的影響,，散點圖需要結(jié)合臨床和檢驗分析前,、中、后仔細分析,，作出合理的解釋,。
紅細胞參數(shù)
①紅細胞體積分布紅細胞參數(shù)寬度（RDW）
②紅細胞血紅蛋白分布寬度（HDW）
HDW反映紅細胞內(nèi)HGB含量異質(zhì)性的參數(shù)，HDW和RDW明顯增高,，見于遺傳性球形紅細胞增多癥,，屬于小細胞不均一性高色素性貧血。HDW對鐮形細胞貧血,、β-輕型珠蛋白生成障礙性貧血也有一定診斷意義,。
③有核紅細胞（NRBC）
新生兒、胎兒可見,，健康成人不見
網(wǎng)織紅細胞參數(shù)
①未成熟網(wǎng)織紅細胞比率IRF
概念：是指幼稚的或未成熟的網(wǎng)織紅細（即含高RNA的網(wǎng)織紅細胞）與總的網(wǎng)織 紅細胞的比值，既IRF= （MFR+HFR）/（LFR+MFR+HFR)
意義：骨髓抑制時,，HFR,、MFR減低（IFR）早于LFR、N,、PLT,；恢復(fù)時HFR、MFR （IFR）迅速增高,。
②網(wǎng)織紅細胞成熟指數(shù)RMI
公式：RMI=（MFR+HFR)/LFR
評價：增高：常見于溶血性貧血,、特發(fā)性血小板減少性紫癜、白血病,、真性紅細胞增多癥和多發(fā)性骨髓瘤,。
減低：常見于與骨髓衰竭或無效造血有關(guān)，如巨幼細胞性貧血,、再生障礙性貧血,。
③網(wǎng)織紅細胞血紅蛋白量RET-He
概念：指網(wǎng)織紅細胞內(nèi)血紅蛋白的含量
公式：CHr=MRV × CHCMr
評價：反映網(wǎng)織紅細胞的質(zhì)量變化，Ret-He達30.5pg為患者需要補充鐵的最佳臨界值,，其靈敏度和特異性高,，與CHr有很好的相關(guān)性。
④網(wǎng)織紅細胞平均血紅蛋白量CHr
概念：平均每個網(wǎng)織紅細胞所含血紅蛋白的量
公式：CHr=MRV × CHCMr,，單位：pg
評價：反映網(wǎng)織紅細胞內(nèi)的鐵含量,，可實時評價骨髓紅系的功能狀態(tài),。
白細胞參數(shù)
①中間細胞群
MID是三分群血液分析儀指標，一般包括正常時的Mon,、E,、B；病理時的各種原始幼稚細胞,、異型淋巴細胞,、漿細胞等。MID計數(shù)異?；驁缶?，需特別注意進行血涂片復(fù)查。由于各種儀器使用的稀釋液和溶血劑白細胞膜作用不一,，因此,，中間細胞群的確切細胞組成并不明確。
②未成熟粒細胞
IG主要包括St,、早幼粒細胞,、中幼粒細胞、晚幼粒細胞,，但不包括原始粒細胞,。有助于篩檢、監(jiān)測白血病反應(yīng),、嚴重或慢性感染,、炎癥、腫瘤,、MDS,、組織壞死。血培養(yǎng)陽性,、IG%高于血培養(yǎng)陰性者,，但靈敏度尚不足以用于預(yù)測感染或菌血癥，IG超過3%,，對指示敗血癥非常特異,，有助于微生物檢測評價。
③造血祖細胞
HPC是反映以CD34陽性的造血祖細胞為主的參數(shù),，特別適合于外周造血干細胞移植過程,，監(jiān)測供體在接受藥物作用后外周血中造血干細胞的變化，便于選擇采集時機,。