全自動生化分析儀試劑存在的問題及解決辦法： 1 優(yōu)質(zhì)的儀器用水 優(yōu)質(zhì)的儀器用水是使用好檢驗試劑的一個十分重要的環(huán)節(jié)之一,。因為測定離子類項目：比如銅,、鐵、鋅,、鈣,、鎂、磷,。 這些項目在使用過程中,，儀器用水的質(zhì)量相當重要,，雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都有制水系統(tǒng)，但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水,，離子交換樹脂在使用一段時間后交換能力明顯下降,，需要定期進行更換，否則制備的水離子含量多,，電導(dǎo)率偏高,。使用含離子超標的水沖洗儀器，直接影響檢驗結(jié)果,。再如血氨,、二氧化碳項目，如果水質(zhì)不好,，儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高,，則檢驗該項目的結(jié)果也會受到嚴重的影響。還有如果血清中含有GLDH（谷氨酸脫氫酶）,而儀器使用水存在氨時,，可消耗NADH，使利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)檢測法結(jié)果偏高,。解決辦法：定期檢測水質(zhì),，當儀器用水的電阻小于1.0MQ時需要更換離子交換樹脂或活性炭。 2 標本的及時分離及測定 標本的及時分離和測定是用好檢驗試劑的首要環(huán)節(jié),，因為凡是利用NADH轉(zhuǎn)化為NAD變化率來檢測其物質(zhì)含量的試驗都或多或少受到血液存放時間的影響,，原因是全血放時間越長紅細胞利用血清中的糖進行無氧酵解產(chǎn)生的丙酮酸，丙酮酸使NADH轉(zhuǎn)化為NAD,，這樣使用測定結(jié)果假性升高,。解決辦法：a、作好與臨床的溝通,。對抽血人員和標本運送人員進行培訓(xùn);b,、及時分離血清并及時檢測；c,、也可將全自動生化分析儀上的延遲時間設(shè)置大于60秒,，這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮酸的干擾，可安全避免假陽性結(jié)果出現(xiàn),。 3 交叉污染 3.1生化分析儀本身的清洗問題造成的交叉污染使用 全自動生化分析儀時,，儀器的交叉污染現(xiàn)象是引起實驗結(jié)果偏離的一個原因。由于全自動生化分析儀試劑針需要解除各種試劑,，一般難以徹底清洗干凈,，所以容易造成分析項目的攜帶污染。而生化項目的測定往往需要僅幾微升樣本,，試劑往往需要幾百微升 ,，尤其在沒有自動清洗程序的流動池式生化分析儀上,，由于前帶現(xiàn)象的存在，如果前一個人標本為高值樣本,，則接后的第一個低值標本結(jié)果應(yīng)慎重報告,。不僅沒有沖洗程序的生化儀器上有這種現(xiàn)象，就是具有自動清洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染,，例如Beckman 全自動生化分析儀CX4,，它的試劑針(probe)、樣品吸樣針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗洗液沖洗,，然后用高壓壓縮空氣吹干,，有時由于洗液壓力和壓縮空氣壓力偏低，使試劑吸針,、樣品針及反應(yīng)攪拌棒沖洗不干凈,、吹不干，從而導(dǎo)致反應(yīng)池之間相互污染,、試劑間交叉污染,，是檢驗結(jié)果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用,，使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的“特氟龍”吸頭不及時更換,，使吸樣針或試劑針密封層增大，產(chǎn)生泄露現(xiàn)象也是造成樣本間及實際間項目污染的一個重要原因,。試劑吸樣和樣品吸樣不準確,，通常導(dǎo)致利用速率法測試的標本系統(tǒng)偏低或偏高。眾所周知,，速率法計算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的,，如果加樣體積或加試劑體積不準，導(dǎo)致真正速率法計算因子和理論計算因子偏離,，從而使測試結(jié)果不準確,。 解決辦法：a、定期進行一期維護和保養(yǎng),；b,、按要求及時更換零部件；c,；定期對儀器進行校準,；d;全自動生化分析標本和試劑用量少，殘存少量即會影響測試結(jié)果,，每天應(yīng)用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒,，保證比色杯清洗后不留賤液，避免比色杯的交叉污染,。 3.2 檢驗項目間的交叉污染 在全自動生化分析儀使用中,，我們發(fā)現(xiàn)一個項目會影響緊隨其后項目的測試結(jié)果,，造成這種影響的原因之一是一種實際中含有另一試驗的測定物質(zhì)而直接干擾其測試結(jié)果。比如：在TP試劑中含有大量的CUSO4,如果將Cu放在TP項目的后面檢測,，會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差,。再如P放在含有磷酸鹽的項目后面，TBA放在含有膽酸鹽的項目后面都會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差,。GLU放在CK和CK-MB的項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差,，LDH放在ALT或者AST 的項目后面可能回使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差,。Ca放在a-amy項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差,，Mg試劑（calmagite法）中含有EGTA，會干擾Ca的測試結(jié)果,。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個項目的PH值相差較大或反應(yīng)對PH要求嚴格的項目,，也會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響， TBA放在TP,ALB,UA,后邊測定,，會使測定結(jié)果偏低等等,。解決辦法：a、調(diào)整試驗的前后順序來消除這種影響；b、在造成污染的項目和受污染的項目之間設(shè)置清洗并設(shè)定清洗的次數(shù),。 4 正確的參數(shù)設(shè)置也是用好檢驗試劑的另一個關(guān)鍵因素 現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定，包括樣品量、試劑量,、波長,、分析方式和延遲時間、測試時間的設(shè)定等,。下面我們就延遲時間和加樣程序的設(shè)定來說明正確使用分析參數(shù)對于正確運用試劑的作用,，比如肌酐苦味酸測定法，我們在設(shè)定延遲時間應(yīng)注意到苦味酸在堿性條件下50秒前首先快速與乙酰乙酸等快速反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物,，而在120秒后堿性苦味酸又能與慢反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽性干擾,，解決辦法：最好設(shè)定延遲時間為50-60秒之間。測定時間少于60秒,，這樣就能充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾,，從而檢測到真正肌酐含量。 5 校準液的正確使用 由于目前生產(chǎn)廠家提供的校準液并非通用的,，只使用于某一特定的分析系統(tǒng),。同一項目不同方法之間有很大差異，同一項目不同方法學(xué)的校準液更不能混用,，但是在臨床檢驗中經(jīng)常會發(fā)生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準液校準,，乳酸脫氫酶L-P法用P-L法校準液校準,，TBA循環(huán)酶法用比色法校準液校準等都會造成測定結(jié)果不準確。另外同一法方學(xué),，不同廠家的校準品和試劑都會有所差異,，解決辦法：a、建議結(jié)合各實驗室條件選擇適合自己實驗室的校準品,，如果條件可進行系統(tǒng)溯源,；b、建立滿足同一方法學(xué),、同一測定條件,、與理論計算的因子（FACTOR）值差異不大，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素,，方可進行校正測定,；c、建立一個可靠的參考系統(tǒng)作為校準性基礎(chǔ),，然后將準確性轉(zhuǎn)移到“使用方法”測定中去,，使“使用方法”測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準確性基礎(chǔ)上來。在實現(xiàn)溯源性目標過程中,，永遠以患者新鮮標本為試驗對象,。以方法學(xué)對比試驗方法為驗證手段，采用回歸方程進行統(tǒng)計分析,，斜率接近1,，截距較小，說明“使用方法”對標本測定結(jié)果和溯源目標參考系統(tǒng)對標本檢測結(jié)果非常接近,，檢測結(jié)構(gòu)可靠,。 6 抗凝劑的使用 目前臨床上常用的抗凝劑有EDTA-K2、肝素,、草氨酸鈉等,，TBA和AFU不能使用肝素抗凝劑，因為肝素會使TBA和AFU試劑發(fā)生混濁,，導(dǎo)致吸光度假性偏高,，從而使檢測結(jié)果偏高，解決辦法：a,、認真參閱試劑說明書b,、作好與抽血人員之間的溝通和培訓(xùn)使抽血人員知道什么項目用何種標本。 7 混成單一試劑的問題 比如酶法肌酐試劑,，第一步R1中的酶要消除樣品中內(nèi)源性肌酸的干擾,，如果混成單一試劑，則會使檢測結(jié)果偏高,，消除法HDL,、LDL也不能混成單一試劑,，則會使測定的HDL和LDL不準確。另外,。有的試劑混成單一試劑后,，穩(wěn)定性和抗干擾能力也會明顯下降。 解決辦法：a,、在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑,；b、如一定要使用單試劑,，最好選擇試劑廠家針對部份項目專門生產(chǎn)好的單試劑 8 試劑瓶的問題 隨著全自動生化分析儀的普及,，“開瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視，但是就目前有的試劑方法學(xué)來講,，還達不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內(nèi)放很長時間不需要定標,，比如ALP、TP,、GSP,、等PH為堿性的試劑，開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳,，使試劑本身的PH值下降,，如果長時間開瓶不定標或者校準，會使檢測結(jié)果發(fā)生偏離,，在國外有的項目有明文規(guī)定,，必須72小時之內(nèi)定標，比如BUN,。但是在國內(nèi)的某些實驗室為了方便,，很長時間都不作校準，導(dǎo)致測定結(jié)果的不準確,，解決辦法：a、了解試劑特性,。及時對部份項目進行校準,，對于每天標本量不多的醫(yī)院，可按照1-2天的用量取用試劑放入儀器,。 9 不同批號試劑想混的問題 目前將不同批號的試劑混合在一起使用的想象在檢驗中經(jīng)常發(fā)生,，當然這一方面是為了節(jié)省成本，另一方面為了方便,。但是不管是什么品牌,、是什么試劑，由于不同批號的試劑生產(chǎn)時間不同,，試劑中工具酶的活性會有差異,，會發(fā)生水解的底物濃度隨時間長短也會不同,。因此混在一起使用而又不定標，可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準確,。還有如果有的試劑開瓶時間太長,，空氣中的灰塵或細菌會進入瓶內(nèi)，由于有的試劑含量有大量的蛋白質(zhì)和鹽,，是細菌生產(chǎn)的最好條件,。雖然有的試劑添加了防腐劑，單防腐劑的方法也有一定限度的,，而且絕大多數(shù)廠家的試劑中是沒有加防腐劑的,。 解決辦法：a、不同批號試劑建議不要混用,，如果混用最好重新定標,。B、 試劑瓶在儀器內(nèi)使用時間不要過長,，及時更換,。C、一般每個試劑瓶內(nèi)由于試劑針不能吸完,，或多或少都會留有幾毫升的試劑,，如果是同一批號可以將未開瓶的同一批號試劑往里倒。但如果不是同一批號的試劑時到如后最好重新定標,，最好的做法是將每個批號的剩余試劑留起來待一定數(shù)量后混在一起,，然后重新定標后檢測 |
