1 基本原理及主要參數(shù)
了解生化分析儀基本參數(shù)的原理,，有利于儀器,、試劑的正確使用,，有助于正確分析和處理測定數(shù)據(jù)。生化分析儀根據(jù)自動化程度分半自動和全自動,，從目前試劑盒供應情況來看,，主要的測定方法為：終點法(包括一點終點法和兩點終點法)、速率法(連續(xù)檢測法),、速率兩點法(兩點法)，后兩種統(tǒng)稱動力學法,。
2 主要參數(shù)設置的技巧
2．1 方法類型可根據(jù)試劑盒要求或反應原理來設置,。對于半自動生化分析儀終點法只是一點終點法，全自動生化儀單試劑選擇一點終點法，而雙試劑選擇兩點終點法,。大多數(shù)酶學測定使用速率法,，尿素氮、肌酐測定等用兩點法,。
2．2 測定波長測定波長選擇有三個主要條件：(1)待測物質(zhì)在該波長下的光吸收最大,。(2)其吸收峰宜較寬而鈍，(3)常見干擾物在該波長下的光吸收最小,。試劑盒說明一般已提供波長參數(shù),。有些儀器波長選擇受濾光片數(shù)量限制，應該就近選擇為原則,。
2．3 測定溫度一般全自動生化儀都是37℃ ,，而半自動生化儀有室溫、25~C,、30cc,、37~C等，終點法由于反應在機外進行,，選擇室溫可以減少儀器溫度調(diào)整時間,，提高工作效率，而速率法和兩點法都選擇37℃比較合適,。
2．4 樣本體積分數(shù)樣品體積分數(shù)即樣品體積與反應液總體積的比值(sv／TV),。酶活力測定中，樣品在總體積中的比例應在10％以下,。一般來說,，待測物質(zhì)在樣品中含量低的、生理波動范圍大的,，樣品用量較大,。如Trinder反應測定血清葡萄糖、膽固醇等,，樣品試劑比例多為1：100,，測定血尿酸或高密度脂蛋白膽固醇，常增加為1：50,；AIJT和AST的樣品試劑比例多為1：10至1：20,。方法靈敏、吸光度高的實驗方法,，樣品試劑比例小,，如白蛋白BCG法，樣品試劑比例常為1：200,。肌酐Jaffe氏法監(jiān)測時間短,、吸光度值較低，樣品試劑比例多為l：10。一般應以試劑說明為準,，不宜輕易改動,。可根據(jù)最終反應液的量來計算樣本量和試劑量,。
2．5 吸液量主要是針對流動比色的全自動或半自動儀器的參數(shù),，原則是吸人量不得大于或等于反應液總體積，否則會導致吸空形成比色池氣泡,，最好留100～200ul的余地,。
2．6 延遲時間延遲時間(Delay Time)指試劑與樣品混合后到監(jiān)測開始之間的時間。延遲時間的選擇取決于被測物質(zhì)的濃度(酶的活性)大小,、反應速度的快慢,、酶促反應的級數(shù)、樣品中干擾物消除所需的時間等,。比如：CHE活性高僅需20— 30秒,，LDH一級反應需30～40秒，AIJT需40～6O秒,，AST需60～75秒,，CK需90～120秒。半自動生化儀上酶活性連續(xù)監(jiān)測法的延遲時間設定,，由于只能單份樣品逐一測定,，若延遲時問全部設置在儀器內(nèi)，每個延遲時間加監(jiān)測時間至少1分鐘以上,，守候時間較長,。工作量大時，可以根據(jù)儀器控溫,、加樣及讀數(shù)和試劑特點,，以及室溫情況，將延遲時問挪一部分到機外,，套式操作,，但要確保機內(nèi)延遲時間不要進入線性反應期。兼顧延遲時間和監(jiān)測時間反應時間是有限制的,。在速率法和兩點法中,，延長延遲時間必然縮短線性監(jiān)測期，減少測定的線性范圍,，也易發(fā)生底物耗盡,。
2．7 監(jiān)測時間 酶促反應延遲期后，在過量底物的存在下,，反應速率加快并達到一個反應速率穩(wěn)定的階段,，即酶促反應以恒定的速率進行,，不受底物濃度的影響，這段時間稱為線性反應期或零級反應期,，自動化生化分析儀的監(jiān)測時間即為此期。測酶的連續(xù)監(jiān)測法至少90—120s或至少4點(3個AA),，少于3個△A不能稱為連續(xù)監(jiān)測法,，因為不能計算線性度。監(jiān)測時間過長則容易發(fā)生底物耗盡,，可測范圍變窄,。
2．8 標準液濃度終點法和兩點法必須設置標準，選擇合格的標準品很重要,。有些試劑盒配有標準液,，但是部分項目標準液定標偏差太大，我們使用的是干粉復合羅氏校準液,，復溶后分裝冷凍保存,，只要復溶的水質(zhì)保證，避免反復凍融,，校準的結(jié)果還是很滿意的,。注意校準液靶值獲得的方法學，方法不同耙值是有差異的,，比較典型的是ALP測定有IFCC和DGKC法,，差異比較大，不可簡單套用,。2．9 K值速率法測定無需帶標準或做標準曲線,，首先確定樣本量和工作試劑量，再根據(jù)被測物質(zhì)的摩爾消光系數(shù),，就
可按速率法計算公式計算出因素K值了,。K=TV×10。／(8×SV XL),，TV為反應液總體積,，sV為樣本體積，L為比色杯光徑(em),，￡為毫摩爾消光系數(shù),，如NADH／NADPH34Onm為6．22，對硝基苯胺405nm為9．9,，5一氨基一2一硝基苯甲酸405rim為9．5,，對硝基酚405nm為10．5，5一硫代一2一硝基苯甲酸405nm為13．3,。
2．10 試劑吸光度上下限有的生化儀要求設置試劑吸光度上下限,，主要是用來監(jiān)測試劑的質(zhì)量的,，但是試劑吸光度上限和下限不是試劑質(zhì)量的唯一指針。因此,，一定的校準頻率和室內(nèi)質(zhì)控是質(zhì)量保證的必需手段,。我們在實際工作中就遇到酶活力測定的試劑空白數(shù)據(jù)在規(guī)定限值內(nèi)，但質(zhì)控物測定結(jié)果連續(xù)偏低,，病人結(jié)果因每天標本少而難以判斷,，最后發(fā)現(xiàn)是試劑質(zhì)量下降。